Western-Blot中BSA,脱脂蛋白的作用是什么？经常有人做Western-Blot会疑惑：为什么做蛋白实验，应该把杂蛋白去除才对，会担心其他蛋白的加入会影响实验结果，增加背景。但为什么偏偏会用加入BSA，脱脂蛋白的方法减少背景呢？这需要从Western-Blot的原理说起，Western-Blot中电泳转膜后让蛋白分布NC膜或PVDF膜上，但膜上还有很多地方是空白的，这些空白的地方如果不被封闭，很可能就会与抗体结合，这样的非特异结合会造成背景的增加，同时，这些蛋白的引入，由于抗原抗体结合的特异性，所以不会造成背景的增加。
1、westernblot和ELISA有什么差别westernblot和ELISA的基本原理是一样的，都是免疫结合反应的原理。一、反应不同：WB可以反映出分子量的信息，ELISA不能。WB一般只能做到半定量，ELISA一般可以定量。二、检测不同：基因翻译蛋白质,PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。
三、灵敏度不同：灵敏度一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。可操作性WB一次处理量就是一块胶版，1020个样品最多了。Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
2、表皮生长因子用elisa还是westernblot检测好westernblot和ELISA的基本原理是一样的，都是免疫结合反应的原理。目的：制备高特异性、高亲和力的抗表皮生长因子单克隆抗体，制备抗表皮生长因子多克隆抗体，利用商品化的基因重组表皮生长因子标准品及酶标二抗等试剂，建立符合临床检测要求的表皮生长因子ELISA检测方法，并对EGF的临床应用价值作初步探讨。方法：1、利用已有冻存的EGF杂交瘤细胞株，经复苏传代至细胞生长良好后，ELISA检测上清液抗体的滴度。
采用辛酸饱和硫酸铵法纯化腹水，吸取少量溶液做5或10倍稀释并用紫外分光光度法测定蛋白含量，采用A280nm和A260nm光吸收差法测定，用WesternBlot鉴定单克隆抗体的特异性并测定单抗的亲和常数。2、以纯化的rhEGF重组蛋白为免疫原免疫新西兰大白兔，获得抗rhEGF多克隆抗体，采用饱和硫酸铵法对抗血清进行纯化，ELISA及WesternBlot方法检测制备的抗血清的效价和特异性。
3、westernblot转膜是怎么做的?蛋白免疫印迹(WesternBlot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上。目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印，湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以EBlotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。